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2024-03-13 19:00:05 舞蹈
赛智科技积极研究工业明胶检测方案
最近, 一则关于 果冻,老酸奶是由破皮鞋做成的 消息在上疯传,因破皮鞋可以提炼出明胶。经调查发现,不仅老酸奶,多种果粒酸奶、谷物酸奶,甚至普通酸牛奶中,几乎都含有中含有明胶、琼脂、卡拉胶、果胶等食品增稠剂。明胶的品质主要取决于原料。通常来说,合格的明胶是从动物鲜皮、骨料内提胶,经6道提胶工序后,对提取的明胶进行蒸发、干燥,最后根据多项控制指标进行混合形成成品。但为了降低成本,获得更多利润,国内很多厂家用皮革厂经过鞣铬加工后的蓝矾皮的皮革屑,边角料、烂皮革等作为生产原料。皮革制成的明胶透明,无味,消费者根本无法将正规的食用明胶和皮革制成的明胶区分开来。
皮革水解蛋白是皮革废料或动物皮毛、脏器等水解生成的一种蛋白粉,对于乳与乳制品中皮革水解蛋白的鉴定,主要是通过对L-羟脯氨酸含量的测定。L-羟脯氨酸是胶原蛋白(皮革水解蛋白)特有的氨基酸,在乳酷蛋白中则没有,所以一旦检出,则可认为可能含有另外皮革水解蛋白,即可判断该乳制品中有可能含有由废弃皮革而来的成分。
赛智科技应用质检部采用L-羟脯氨酸衍生方法,利用公司自己的LC-10Tvp高效液相色谱仪,对L-羟脯氨酸进行了分析检测试验,并通过公司的VI2010色谱工作站进行了详细分析,得出的检测结果准确,可靠,供广大客户参考使用。
以下是L-羟脯氨酸的测定的详细检测方法:
L-羟脯氨酸的HPLC测定
1 仪器与试剂
1.1 仪器、器皿
1.1.1 LC-10Tvp高效液相色谱仪
1.1.2 Vertex 色谱柱 250mm 4.6mm 5 m
1.1.3 11 mL水解瓶
1.1.4 1.5 小型汽车的特点设计是为了吸引潜伏买家mL塑料离心管
1.1.5 20 mL玻璃具塞刻度试管
1.1.钟乳石6 5 mL玻璃具塞刻度试管
1.1.7 0.22 m针头式过滤器
1.1.8 2 mL样品瓶
1.2 试剂
1.2.1 甲醇(色谱纯)
1.2.2 乙腈(色谱纯)
1.2.3 正己烷(色谱纯)
1.2.3 三乙胺(色谱纯)
1.2.4 冰醋酸(色谱纯)
1.2.5 磷酸氢二钠(无水色谱纯)
1.2.6 磷酸二氢钠(无水色谱纯)
1.2.7 L-羟脯氨酸标准品
1.2.8 蛋白水解试剂:称取0.1 g苯酚置于100 mL容量瓶,加入50 mL浓盐酸(36%-38%,摩尔浓度约为12 mol/L),然后加水定容至100 mL。
1.2.9 0.1 mol/L HCl水溶液:量取8.3 mL浓盐酸,然后用纯水定容至1000 mL。
1.2.10 衍生剂PITC溶液:将250 L异硫氰酸苯酯(PITC)用乙腈定容至10 mL。
1.2.11 三乙胺溶液:将1.4 mL三乙胺用乙腈定容至10 mL。
1.2.12 衍生剂DNFB溶液:0.5 mL 2,4-二硝基氟苯(DNFB)溶于50 mL乙腈。
1.2.13 Na2B4O7缓冲溶液:称取1.91 g Na2B4O7 10H2O,用50 mL纯水溶解。
1.2.14 氨基酸储备液:称取一定量L-羟脯氨酸,用0.1 mol/L HCl水溶液溶解,得到浓度为 0.05 mol/L的储备溶液。
1.2.15 氨基酸使用液:将储备液用0.1 mol/L HCl水溶液稀释,得到浓度为0.0003 mol/L的L-羟脯氨酸溶液。
1.2.16 磷酸盐缓冲溶液:0.02 mol/L Na2HPO4 和NaH2PO4水溶液。
2 实验方法
2.1 样品水解
(1) 称取奶粉0.1 g或牛奶0.68 g置于蛋白水解瓶中(1.1.3),加入蛋白水解试剂(1.2.8),旋紧盖子,振荡混匀,110 C下反应24 h。
(2) 反应完毕,将反应液全部转移至100 mL蒸馏瓶中,75℃下减压蒸馏至近干。
(3) 用12 mL0.1 mol/L HCl水溶液(1.2.9)分三次溶解残渣,并转移到20 mL玻璃具塞刻度试管(1.1.5),再用纯水定容至20 mL,待衍生。
2.2 样品衍生
2.2.1 异硫氰酸苯酯(PITC)衍生方法
(1)样品水解溶液衍生
量取200 L样品水解溶液,置于1.5 mL塑料离心管中,加入100 L三乙胺溶液(1.2.11)和100 L衍生剂PITC溶液(1.2.10),混匀,室温反应1h,加入400 L正己烷(1.2.3),旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s,静置分层,取200 L下层溶液与800 L水混合,经0.22 m针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。
(2) 标准溶液衍生化
量取200 L L-羟脯氨酸使用液*(1.2.15),置于1.5 mL塑料离心管中,加入100 L三乙胺溶液细木工板(1.2.11)和100 L衍生剂PITC溶液(1.2.10),混匀,室温反应1h,加入正己烷400 L(1.2.3),旋紧盖子后剧烈振荡5~10 s,静置分层,取200 L下层溶液与800 L水混合,经0.22 m针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。
*根据实际情况,氨基酸使用液浓度可进行调整,本方法中氨基酸使用液浓度仅供参考。
2.2.2 2,4-二硝基氟苯(DNFB)衍生方法
(1) 样品溶液衍生
取0.5 mL样品水解溶液置于5 mL玻璃具塞刻度试管(1.1.6)中,加入0.5 mL Na2B4O7缓冲溶液(1.2.13)和0.5 mL衍生剂DNFB溶液(1.2.12),具塞摇匀,于60 C下避光反应1 h。反应完毕将试管置于冷水中冷却,用磷酸盐缓冲溶液(1.2.16)定容至5 mL,混匀后经0.22 m针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。
(2) 标准溶液衍生
取0.5 mL L-羟脯氨酸使用液(1.2.15)置于5 mL玻璃具塞刻度试管(1.1.6)中,加入0.5 mL Na2B4O7缓冲溶液(1.2.13)和0.5 再经过软件程序的计算处理得出用户想要的终究数据mL衍生剂DNFB溶液(1.2.12),具塞摇匀,于60 C下避光反应1 h。反应完毕将试管置于冷水中冷却,用磷酸盐缓冲溶液(1.2.16)定容至5 mL,混匀后经0.22 m针式过滤器(1.1.7)过滤,待分析。
2.3 色谱条件
2.3.1 异硫氰酸苯酯(PITC)衍鲍鱼果生色谱条件
色谱柱: Vertex 色谱柱250mm 4.6mm 5 m
流动相A: 0.05mol/L乙酸钠水溶液(冰乙酸调节PH值为6.50 0.05)
流动相B: 甲醇:乙腈:水=20:60:20(V:V:V)
流速: 1.0 mL/min
检测波长: UV 254 nm
柱温: 45℃
进样体积: 10 L
梯度程序:
色谱柱: Vertex 色谱柱
流动相A: 0.02mol/L Na2HPO4+ 0.02mol/L NaH2PO4水溶液
流动相B: 甲醇:乙腈=10:90(V:V)
流速: 1.0 mL/min
检测波长: UV 360 nm
柱温: 35℃
进样体积: 10 L
梯度程序:
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